无菌操作及愈伤组织诱导技术

无菌操作及愈伤组织诱导技术

实验准备：
烟草无菌试管苗培养：将烟草种子用消毒液84＃消毒后，无菌水洗3次，无菌吸水纸吸干水分，接种在MS培养基上。种子苗具4-5叶时继代扩繁90盒，保证每学生1盒。
无菌培养皿每学生2套。
实验课开始前30min. 将实验用具、培养基及无菌烟草苗同时用酒精用75%酒精擦洗后置于超净工作台，打开超净工作台风机和紫外灯。

2.1 实验目的
掌握无菌操作技术；基本掌握植物愈伤组织诱导培养技术和调控条件。

2.2实验材料及设备
外植体材料：烟草无菌苗叶片；实验1配制的培养基。
设备及工具：超净工作台；不锈钢镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯等；75%酒精。

2.3 操作方法
A. 在自来水管下将手洗净，然后用75%酒精将手消毒，再进入超净工作台开始接种操作。
B. 点燃酒精灯，将镊子、解剖刀在酒精灯下烤干。
C. 取一无菌培养皿，然后用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中，并用锋利解剖刀将叶片切成2mm2左右的小片，然后将其接种于准备好的培养基上，一般每瓶接种4-5小片。
D. 快速封好瓶口，用记号笔写上姓名和接种日期。
E. 接种后的三角瓶置于24℃，条件下黑暗培养一周，然后在同样温度下有光照和全黑暗下培养直至愈伤组织形成。
注意外植体切割时，动作要快，否则会造成失水而影响生长。为防止操作时失水也可在培养皿中滴几滴无菌水，然后将无菌苗置于其中进行切割。

2.4 记载内容
培养基凝固状况；实验操作过程；叶片生长状况、接种外植体大小；每瓶接种数、接种总瓶数。