种子细胞筛选与细胞规模化培养

种子细胞筛选与细胞规模化培养

实验准备：
经过多次继代的悬浮细胞；配置含8%琼脂糖的固体培养基，按组分装成7份；配置液体培养基2升；每人2套灭菌培养皿。

5.1 实验目的
掌握单细胞分离和培养技术；了解细胞规模化培养设备与进样接种技术。

5.2 种细胞的筛选
单细胞平板培养。
A. 将琼脂糖培养基在加热器上融化，将悬浮细胞过滤除去大的细胞团，然后离心并将密度调整至5×105左右。
B. 将融化的琼脂培养基在未凝固前，与上述细胞悬浮液按4:1混合后，平铺在培养皿中，操作时特别注意温度不能过高，以免给细胞造成伤害。
C. 在细胞分裂形成可见的小愈伤组织时，将单个细胞的愈伤组织分别接种在平板培养基上单独培养，由每个细胞形成的愈伤组织即为一个细胞系（clone）。

* 实际应用中，待单个愈伤组织长至能检测成分的大小时，取每个愈伤组织的一半用于成分分析，另一半继续培养。成分分析完成后，淘汰不符合要求的愈伤组织，对复合要求的愈伤组织扩大繁殖。繁殖到一定规模后即可用于规模化生产。

5.3 细胞规模化培养
以班为单位，将各自的悬浮细胞收集在一起，按照生物反应器的进样操作接种，接种后每隔3天取样测定培养情况，2周后结束实验，根据测定结果绘制细胞生长曲线图。