细胞悬浮培养

细胞悬浮培养

实验准备：
用MS培养基配置2%的果胶酶并用过滤灭菌器过滤；配置液体培养基分装于200ml的三角瓶中，每瓶50ml。
培养基配方：MS无机盐附加烟酸0.05mgL-1、VB6和VB1各0.01mgL-1、甘氨酸3mgL-1、肌醇100mgL-1、激动素0.2mgL-1、2,4—D 0.1mgL-1、蔗糖20gL-1，pH5.8。

4.1 实验目的
了解细胞悬浮系建立的全过程，掌握细胞液体悬浮培养技术。

4.2 实验材料
烟草叶片在黑暗条件下培养形成的愈伤组织，再经过1-2次增殖培养后用于悬浮细胞系的建立（可与体细胞胚诱导实验同时培养）。

4.3 操作方法
A. 按照实验2相同的步骤，作好无菌操作准备。
B. 在净化工作台上，用无菌注射器将果胶酶1ml加入到已灭菌的含有液体培养基的三角瓶中，轻轻摇匀，再将复合要求的松散愈伤组织用细胞铲接种于液体培养基中。接种量大约为培养基体积的十分之一。
C. 接种后的三角瓶用1/100的天平称取重量并记载，然后置于摇床上，在转速100rpm，25℃下培养。
D. 培养24小时后，将培养物收集到50的离心管中，在800 rpm下离心5min.，去除含有果胶酶的培养基，加入新鲜培养基，摇匀再离心一次，去除上清夜，然后按照细胞与培养基1：10的比例接种到三角瓶中。
E. 培养5天后观察结果。

4.4 结果观察内容
采用重量法测定细胞生长量。