电子说
本文开发了一种基于智能手机控制的自动化便携式系统,采用 LAMP 等温扩增技术可实现对特定病原体靶标的检测。采用磁珠法来纯化病毒或细菌样品。在低温下实现病原体裂解。
扩增过程中采用比色法对其扩增结果进行比色分析。整个检测过程可在 40 min 内完成。
检测病原体的系统操作流程如图 1 所示。
图 1
所有试剂均在片外制备并在检测前装入芯片对应的腔室中。
液体通过毛细力自发填充微通道,并被疏水软阀阻止,这可以通过设备上配备的冲压机构按需触发。
芯片整体结构如图 2 所示。
图 2
颜色强度(病毒或细菌载量)由颜色传感器测量,整个分析过程可在 40 min 内自动执行。
如图 3 所示,自驱动微流控芯片由 PDMS 微流控结构层、亲水膜、疏水 PDMS 层和玻璃基板组成。
图 3
如图 4 所示,该芯片具有两个模块:样品预处理模块和 LAMP 反应模块。
前者由 4 个深度为 2 mm 的储液腔组成,用于储存样品、磁珠、洗涤缓冲液和裂解缓冲液,其储液腔直径分别为 4、4、6 和 5 mm。液体通道的宽度和高度分别为 600 μm 和 500 μm。出口腔内放置了一个毛细管泵和四张滤纸用于液体输送,收集废液。
LAMP 反应模块由单独用于阴性对照、阳性对照和测试样品的区域(直径 6 mm,高 0.5 mm)。
图 4
样品检测区 通过蛇形通道与 样品预处理区 相连; 该通道可以减少 LAMP 扩增期间的液体回流,因为它相对窄 (400 μm)、较长且具有多个直角转弯。
在每个储液腔的下游端插入疏水软阀用来阻止液体流动。每一个阀都可以通过一个冲压机构单独激发。双入口和单入口疏水软阀的最大宽度分别为 3400 和 1900 μm,阀门的高度均为 550 μm。
图 5
在进行分析之前,将所有试剂加载到芯片上相应容器中,包括 20 μL 病原体样品、20 μL 磁珠、25 μL 、20 μL 裂解缓冲液和 25 μL LAMP 反应混合物。
首先通过机械结构按压疏水软阀使其关闭,让样品和磁珠充分接触。然后将其转移到反应腔中在室温下孵育 5 min。同时在按压疏水软阀的同时施加垂直方向的振动搅拌,从而实现高效混合。 系统结构如图 6 所示。
图 6
本文通过一个机械模块来控制一个冲床(punch)在 Z 轴方向以 6.9 Hz 的频率反复上下撞击混合区域来实现高效混合(图 7d)。该方法可使得混合效率在 1 s 内从 28.9 % 增加到 98.6 %(图 7e)。
图 7
审核编辑:刘清
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