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分子诊断是以核酸作为检测对象,主要应用于临床各科的诊断中,如肿瘤、感染、遗传等各方面,而核酸提取是分子诊断实验的“第一步”。通过对磁珠进行一定的包被(如硅基、氨基、羧基等),从而可以实现对核酸的高通量、自动化提取,这一技术产生于20世纪80年代,已经有了成熟的试剂盒并形成为产业。
磁珠的用武之地:
体外诊断(In-Vitro Diagnostics)
提到磁珠,就不得不提一下目前大热的体外诊断研究,磁珠在其中扮演着不可替代的重要角色。体外诊断(简称IVD)根据其检验原理和方法的不同可分为血液学诊断、生化诊断、免疫诊断、分子诊断、微生物诊断、尿液诊断、凝血诊断等,在我国目前生化诊断市场较为成熟,免疫诊断中以化学发光和分子诊断为发展速度较快的细分市场。
据统计,全球IVD市场于2013年已达到554亿美元,并有望在2018年达到800亿美元规模,欧美日等发达国家是IVD消费的主要市场。具体到产品分类上,POCT、微生物和免疫诊断占比较多,POCT类主要是因为欧美等发达国家的饮食结构和体制原因,在IVD市场中血糖快检应用较多,故而占据了较大比重。
细分产品占比
磁珠法提取核酸的原理及步骤
核酸结合到磁珠上主要依靠静电作用、疏水作用和氢键作用。细胞或组织在裂解液作用下释放DNA/RNA,此时经过表面修饰的超顺磁性纳米磁珠即与核酸进行“特异性结合”形成“核酸-磁珠复合物”,复合物可在外加磁场的作用下被分离,最后经过洗脱液洗去非特异性吸附的杂质、去盐、纯化后,可得到欲提取的核酸物质。
图3. 磁珠法提取核酸流程示意图
传统核酸提取法与磁珠法比较
随着基因检测、个性化给药、产前诊断等技术的快速发展,生物界各领域都以追求自动化、高通量为诉求,在此背景下磁珠法提取DNA要比传统方法(Chelex100 法、有机法、二氧化硅法、盐析法等)更为简便快捷、安全环保,并且磁珠与核酸进行特异性结合提取得到的产物纯度和浓度都更高。
截止目前,超过30家企业的45款试剂盒获CFDA批准用于临床检验应用,共计22家企业的核酸提取仪获CFDA批准进口和国产各占50%。
表2. 磁珠提取核酸法与传统提取法基本信息对比
诚意之作:纳微磁珠——MagneStar
MagneStar超顺磁珠是纳微科技(Nano-Micro)开发的具有均一粒径、快速磁反应速度、超高比表面积及生物学惰性的磁珠产品,由于其在蛋白、核酸、抗体和细胞的分离方面具有独特优势,是高通量生物样品制备的理想选择,广泛用于体外诊断(IVD)化学发光、核酸提取、基因测序片段筛选、细胞分离、靶向药物载体等重要领域。MagneStar超顺磁珠包括:磁珠母球、羟基磁珠、氨基磁珠、羧基磁珠和Protein A磁珠。
MagneStar超顺磁珠的优势
MagneStar产品属性一览表
*核壳型(PF):以磁性Fe3O4为核,以SiO2或高聚物为外壳层,比表面积大,磁含量高
*单分散夹层型(PFI):以单分散的聚合物为核心,中间层为磁性Fe3O4,最外层是无机材料,以降低非特异性吸附
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