分光光度计具体是测什么_分光光度计原理介绍

什么是分光光度计

分光光度计是用不连续的波长采样反射物体或透射物体的一种测量仪器。由于不同物体分子的结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同，因此，每种物体都具有特定的吸收光谱。能从含有各种波长的混合光中，将每一种单色光分离出来，并测量其强度的仪器叫做分光光度计。

分光光度法是比色法的发展。比色法只限于在可见光区，分光光度法则可以扩展到紫外光区和红外光区。分光光度法则要求近于真正单色光，其光谱带宽最大不超过3－5nm，在紫外区可到1nm以下，来自棱镜或光栅，具有较高的精度。分光光度计？就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。分光光度计可分为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。

 

分光光度计组成

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。

分光光度计特点

独特的双光路、双光束光学系统，仪器分辨率更高，杂散光更低，稳定性、可靠性更强，分析更加准确；

采用320*240位点阵式高亮6 ”液晶显示器，显示清晰，信息完备；

独特的长光程光路设计，使仪器分辨率更高，尤其适合微量测试 强大的数据处理功能，使测试结果能得到充分的应用，用户编辑更为简单快捷；

采用悬架式光学系统设计，整体光路独立固定在16mm厚的铝制无变形基座上，底板的变形和外界的震动对光学系统不产生任何影响，从而大大提高了仪器的稳定性和可靠性；

采用同步正弦机构，波长准确度高，重复性好；

采用ARM系统；

0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0六档光谱带宽自动可选，满足不同用户的测量需求；

24位高速、高精度A/D转换，仪器精度更高、反应速度更快；

主要元件采用进口配置，使仪器杂散光更低、稳定性、可靠性更强；

功能更加强大，主机可独立完成光度测量、定量测量、光谱扫描、动力学、DNA/蛋白质测试，多波长测试及数据打印等功能；

充分考虑不同用户的使用习惯，本系列仪器都标配元析公司光谱扫描软件，联机操作时，除能实现主机的所有测试功能外，还可实现更为强大的数据处理功能，并且使数据存储达到无限。

 

分光光度计原理

分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光线透过测试的样品后，部分光线被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系如下式：

A=-lg（I/I0）=-lgT=kLc

式中：A为吸光度；

I0为入射的单色光强度；

I为透射的单色光强度；

T为物质的透射率；k为摩尔吸收系数；

L为被分析物质的光程，即比色皿的边长；

c为物质的浓度；

物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度，即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定，故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。

紫外分光光度计能用来测什么

分光光度计是食品厂、饮用水厂办理QS、HACCP认证的必备检验设备。紫外吸收光谱分析主要用于已知物质的定量分析和纯度分析。

1）测定溶液中物质的含量

测定标准溶液（浓度已知的溶液）和未知液（浓度待测定的溶液）的吸光度，进行比较，由于所用吸收池的厚度是一样的。也可以先测出不同浓度的标准液的吸光度，绘制标准曲线，在选定的浓度范围内标准曲线应该是一条直线，然后测定出未知液的吸光度，即可从标准曲线上查到其相对应的浓度。

2）用紫外光谱鉴定化合物

用各种波长不同的单色光分别通过某一浓度的溶液，测定此溶液对每一种单色光的吸光度，然后以波长为横座标，以吸光度为纵座标绘制吸光度──波长曲线，此曲线即吸收光谱曲线。各种物质有它自己一定的吸收光谱曲线，因此用吸收光谱曲线图可以进行物质种类的鉴定。紫外吸收光谱比较简单，同一种物质的紫外吸收光谱应完全。

 

分光光度计指标

型号UV-9000波长范围190-900nm；光谱带宽0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0nm六档可选波长，准确度±0.1nm（D2 656.1nm）、 ±0.3nm；全区域波长重复性≤0.1nm。

光度准确度：±0.2%T

光度重复性：≤0.1%T

杂散光：≤0.01%T

稳定性：±0.0004A/h（500nm处）

基线平直度：±0.001A

噪声水平： ±0.0004A/h

光度范围：0-200%T

电源：AC 220V/50Hz或110V/60Hz

重量：30kg

技术参数：

波长范围：320∽1000nm

光谱带宽：4nm

杂散光：≤0.5%（在360nm处）

波长准确度：优于±2nm

透射比准确度：≤±1nmT

 

分光光度计的用途

（1）可见分光光度计

用来测量待测物质对可见光（400～760nm）的吸光度并进行定量分析的仪器，称为可见分光光度计。可在600nm测定细菌细胞密度。

（2）紫外可见分光光度计

紫外可见光谱仪用来测量待测物质对可见光或紫外光（200～760nm）的吸光度并进行定量分析的仪器。可以测定核酸和蛋白的浓度，也可以测定细菌细胞密度。

紫外分光光度计又可分为单光束，假双光束，双光束。它们的用途又有区别。

单光束：适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。 双光束：自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。

假双光束也就是比例双光束，它的原理是由同一单色器发出的光被分成两束，一束直接到达检测器，另一束通过样品后到达另一个检测器。这种仪器的优点是可以监测光源变化带来的误差，但是并不能消除参比造成的影响。

（3）红外分光光度计

一般的红外光谱是指大于760nm的红外光谱，这是研究有机化合物最常用的光谱区域，能分析各种状态（气、液、固）的试样。 红外光谱法的特点是：快速、样品量少（几微克-几毫克），特征性强（各种物质有其特定的红外光谱图）、能分析各种状态（气、液、固）的试样以及不破坏样品。

（4）荧光分光光度计

荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。应用于科研、化工、医药、生化、环保以及临床检验、食品检验、教学实验等领域。

通过对这些参数的测定， 不但可以做一般的定量分析， 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化，从而阐明分子结构与功能之间的关系。

（5）原子吸收分光光度计

该法主要适用样品中微量及痕量组分分析常规仪器之一。是材料分析及质量控制部门进行常量、微量金属（半金属）元素分析的有力工具。

分光光度计注意事项

（1）分光光度计应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防止灯泡灯丝发亮不稳定。

（2）分光光度计使用前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理，以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前，应该对仪器的安全性能进行检查，电源接线应牢固，通电也要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再按通电源开关。

（3）分光光度计在仪器尚未接通电源时，电表指针必须于“0”刻线上，若不是这种情况，则可以用电表上的校正螺丝进行调节。

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