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酪氨酸激酶受体多肽片段在SPR传感芯片表面的磷酸化及其与下游蛋
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2011-02-08
nana
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摘要：胰岛素样生长因子21受体(IGF21R)信号转导通路与各种正常生理活动及多种疾病发生密切相关。将IGF21R来源的未磷酸化多肽序列LYASVNPEY固定于表面等离子体共振(SPR)生物传感器专用的CM5芯片表面,以含有相应蛋白激酶的细胞裂解液进行处理,利用SPR生物传感器和抗酪氨酸磷酸化抗体PY20进行酪氨酸磷酸化水平检测。结果表明:PY20能灵敏地检测多肽酪氨酸磷酸化水平变化,即能够区分不同孵育时间以及不同成分的细胞裂解液所引起的多肽酪氨酸磷酸化水平差异;研究了IGF21R来源多肽的酪氨酸磷酸化对多肽2蛋白间相互作用的影响,证实了只存在磷酸化的多肽与其下游的胰岛素受体底物(IRS21)相互作用,测定了此磷酸化的多肽与IRS21的亲和常数(KA)为(2.02?0.09)@108Lmol-1、结合速率常数(ka)为(2.30?0.15)@106Lmol-1s-1以及解离速率常数(kd)为(1.14?0.13)@10-2s-1。这种新型的模拟受体的多肽酪氨酸磷酸化研究方法可用于受体磷酸化信号通路的研究以及基于这些信号通路的药物筛选研究。
关键词：表面等离子体共振,生物传感器,胰岛素样生长因子21受体激酶,酪氨酸磷酸化,亲和力
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